1、课后限时集训(三十七)微生物的培养和应用(建议用时：40分钟)1(2020烟台市高三模拟)有关微生物的培养与应用，下列说法正确的是()A通常使用液体培养基分离获得细菌单菌落B大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段C接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格灭菌处理D某一稀释度的3个平板的菌落数依次为M1、M2、M3，以M2作为该样品菌落估计值B通常使用固体培养基分离获得细菌单菌落，A错误；大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段，B正确；培养基、培养皿、接种环都需要使用恰当方式进行灭菌处理，而实验操作者的双手只能进行消毒而不能进行灭菌
2、处理，C错误；某一稀释度的3个平板的菌落数依次为M1、M2、M3，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，以它们的平均值作为该样品菌落数的估计值，D错误。2(2020临沂市高三二模)聚羟基脂肪酸酯(PHA)是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，且废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA菌种的流程图如下。下列说法正确的是()取湖水接种在培养基上培养挑取单菌落，分别扩大培养检测菌的数目和PHA的产量获得目标菌株A步骤可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上B扩大培养时，接种后需要将培养基放入恒温箱倒置
3、培养，以防杂菌污染C所用到的培养基应加入琼脂，以便挑取单菌落获得纯化菌株D挑取菌落时，应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量D步骤可用稀释涂布平板法接种到含盐量较高的选择培养基上，A错误；扩大培养应选用液体培养基，B错误；液体培养基中不应加入琼脂，C错误。3(2020日照市高三联考)圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌组合可有效将餐厨垃圾中的有机质迅速分解成水和CO2。为制备分解餐厨垃圾的微生物菌剂，实现废物的资源化利用，研究人员采用稀释涂布平板法进行了两菌种的最佳接种量比例的探究实验，结果如图所示。下列叙述正确的是()A由图可知，制备所需菌剂的最佳两菌种的接种量比例为21B可采用平板计数法替代稀释
4、涂布平板法统计图中的有效菌落数C涂布平板的所有操作都应在酒精灯火焰旁进行，而系列稀释操作不需要D制备好的菌剂可接种到固体斜面培养基上并放入4 的冰箱中临时保藏D根据图示可知，两菌种的最佳接种量比例为11时，有效菌落数最大，故处理该餐厨垃圾废液，两菌种的最佳接种量比例为11时，效果最佳，A错误；平板划线法不能用于计数，B错误；涂布平板的所有操作和系列稀释操作都应在酒精灯火焰旁进行，以防止杂菌污染，C错误；制备好的菌剂可接种到固体斜面培养基上并放入4 的冰箱中临时保藏，D正确。4(多选)(2020淄博市高三诊断)研究人员为了分离得到厌氧固氮菌，进行了下列实验操作步骤：将土样稀释涂布到不含氮的选择培
5、养基平板上，放置于厌氧培养罐中。培养一段时间后，在平板上长出了菌落。用“影印法”将上一步平板中的细菌复制到两组缺氮的选择培养基平板上，分别置于厌氧培养罐内、外保温培养。相关叙述正确的是()A步骤和步骤利用厌氧培养罐培养细菌时，需保留氮气B步骤平板上生长出的细菌是厌氧固氮菌或兼性厌氧固氮菌C在厌氧培养罐内外均能生长的为兼性厌氧固氮菌D在厌氧培养罐外的平板上不生长、厌氧培养罐内的平板上生长的为厌氧固氮菌ABCD步骤和步骤要筛选出固氮菌，培养基应不含氮，但培养罐中需保留氮气，A正确； 步骤在厌氧培养罐中生长出的细菌，可能是厌氧固氮菌，也可能是兼性厌氧固氮菌，B正确；在厌氧培养罐内外均能生长，说明既能
6、进行有氧呼吸又能进行无氧呼吸，为兼性厌氧固氮菌，C正确；在厌氧培养罐外不生长、厌氧培养罐内能生长，说明只进行无氧呼吸，为厌氧固氮菌，D正确。5(2020河北省高三期末)配制培养基时可根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求，加入某些物质或除去某些营养物质以抑制其他微生物的生长，也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性，在培养基中加入某种化学物质，从而筛选出待定的微生物，这种培养基叫做选择培养基。根据有关内容回答以下问题：(1)制备牛肉膏蛋白胨培养基的一般步骤是计算、称量、溶化、_、_。(2)某同学在做微生物实验时，不小心把大肠杆菌和酵母菌混合在一起。请你完成分离得到纯度较高的大肠杆菌和酵母
7、菌的实验步骤并回答有关问题：主要步骤：制备两种培养基：一种_的培养基，另一种加青霉素的培养基。分别分成两份，依次标上A、A、B、B备用。培养基应采用_法灭菌。分别向A、B培养基中接种_。接种后，放在恒温箱中培养34天。试说明观察到的培养结果：_。分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A、B培养基中。接种后，把A、B培养基放入恒温箱中培养34天。第两个步骤的目的是_。解析(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。(2)青霉素不影响酵母菌的生长繁殖，但会抑制大肠杆菌的生长繁殖，大肠杆菌的代谢产物能与伊红美蓝发生特定的颜色反应，使菌落呈黑色，所以一种培
8、养基加入伊红美蓝，一种培养基加入青霉素。对培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。分别向A、B培养基中接种混合菌。接种后培养的结果：伊红美蓝培养基上的黑色菌落是大肠杆菌，加青霉素的培养基上生长的菌落是酵母菌。分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A、B培养基中培养，目的是获得纯度较高的大肠杆菌和酵母菌。答案(1)灭菌倒平板(2)加入伊红美蓝高压蒸汽灭菌混合菌伊红美蓝培养基上的黑色菌落是大肠杆菌，加青霉素的培养基上生长的菌落是酵母菌获得纯度较高的大肠杆菌和酵母菌6“采集菌样富集培养纯种分离性能测定”是从自然界筛选嗜盐菌的一般步骤。 回答下列问题。(1)培养嗜盐菌的菌样应从高盐环境采集，理
9、由是_。(2)富集培养所用培养基为选择培养基。 对嗜盐产淀粉酶微生物的富集培养时，所用培养基在组成成分上的特殊之处在于_。 在富集培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，目的是_(答出1点即可)。(3)纯种分离嗜盐菌时，常用的两种接种方法有_，后者的效果图如图甲所示。甲乙(4)采用图甲和图乙所示的固体平板培养嗜盐菌时，平板要倒置培养。这样处理的目的是_。(5)利用图甲所示接种方法统计采集菌样中微生物数量，为了使统计结果较为准确，随机预留一部分空白培养基的用途是_；统计接种的培养基中单菌落数时，每天统计的结果可能不同，应以_为准。解析(1)嗜盐菌喜好生活在高盐的环境中，因此培养嗜盐菌的菌样，应从高
10、盐环境采集。(2)对嗜盐产淀粉酶微生物的富集培养应选择以淀粉为唯一碳源的培养基，并在高盐条件下培养。在富集培养过程中，将锥形瓶放在摇床上振荡，除了使菌株与培养液充分接触以提高营养物质的利用率外，还能增加培养液中的溶氧量，以保证微生物对氧的需求。(3)纯种分离嗜盐菌时，常用的两种接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(4)采用固体平板培养细菌时，为了防止平板冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(或避免培养基中水分的过快挥发)，需要倒置培养。(5)利用稀释涂布平板法统计采集菌样中微生物数量，为检测培养基灭菌是否合格，应随机预留一部分空白培养基。统计接种的培养基中单菌落数时，每天统计的结果可能不
11、同，应以每个平板上菌落数不变时的平均值为准。答案(1)嗜盐菌喜好生活在高盐的环境(2)淀粉是唯一碳源，盐含量较高使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；增加培养液中的溶氧量，以保证微生物对氧的需求(答出任意1点即可)(3)平板划线法和稀释涂布平板法(4)防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(或避免培养基中水分的过快挥发)(5)检测培养基灭菌是否合格每个平板上菌落数不变时的平均值7聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料，科学家发现了以PET为碳源和能量来源的细菌，该发现对PET类材料的回收利用、环境治理意义重大。请回答下列问题：(1)实验小组欲从土壤中获取PET降解菌，
12、需将土壤样品置于以_为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是_。(2)该实验小组选取PET浓度为800 mgL1的富集液进行系列稀释，分别取103、104和105倍数的稀释液01 mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为(286、298、297)，(35、32、31)，(36、7、2)，不适合用于计数的为_倍数的稀释液，用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是_。(3)倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是_。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养大肠杆菌，原因是_。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中
13、，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线，原因是_。(4)在保藏PET降解菌菌种时，可采取_的方法进行长期保存。解析(1)欲从土壤中获取PET降解菌，需将土壤样品置于以PET为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌。(2)为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，据此结合题意可知：不适合用于计数的为105倍数的稀释液。用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数，得到的细菌数不一致的原因可能是稀释倍数为103时，更多的菌落连在一起最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为104组的结果。(3)倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰
14、，其目的是灭菌，防止微生物污染。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此这个平板不能用来培养大肠杆菌。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，为使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线。(4)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。答案(1)PET增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌(2) 105稀释倍数为103时，更多的菌落连在一起最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为104组的结果(3)灭菌，防止微生物污染空气中的微生
15、物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落(4)甘油管藏8(多选)(2020山东省实验中学打靶试题)大肠杆菌的体积通常在053 m，为分离获得某噬菌体，实验操作如图。据图分析，下列有关说法正确的是()A选择污水，因为其中含有大量的大肠杆菌，容易分离获得B离心是为了促进噬菌体和大肠杆菌的分离C孔径022 m，是为了过滤大肠杆菌和其他细菌D过程表示稀释涂布平板法，结果表明滤液中含有噬菌体CD选择污水是因为其中含有大量的大肠杆菌，易分离获得寄生于大肠杆菌体内的噬菌体，A错误；离心是为了得到含大肠杆菌和噬菌体的上清液，B错误；孔径022
16、 m，大肠杆菌无法通过，C正确；过程表示稀释涂布平板法，结果出现噬菌斑，表明滤液中有噬菌体，D正确。9(2020湖南省雅礼中学高三月考)据悉，在近期举行的中国饲料发展论坛上，农业农村部兽医局局长冯忠武表示，药物饲料添加剂将在2020年全部退出，并明确了养殖端减抗和限抗的时间表。(1)药物饲料添加剂一般添加抗生素的理由是_。(2)滥用抗生素的后果是导致细菌的_增强，且长期使用让畜禽机体免疫力_；抗生素在畜禽产品中造成残留，对人体健康和动物产品的出口有很大的影响。(3)某科研小组欲调查现在猪群中肠道耐抗生素微生物的比例，进行了如下实验：培养基的配制和灭菌：分别配制含一定浓度抗生素的培养基A和_培养
17、基B，用_法进行灭菌，倒平板备用。菌种分离与培养：用_对猪肠腔液进行梯度稀释，每个稀释梯度取01 mL，用_法接种到A、B培养基上各三个平板。为了排除培养基被污染，需设置_作为空白对照，然后在其他条件适宜的_(填“有氧”或“无氧”)环境中培养12天。计数：选择菌落数在_的平板进行计数，计算出_。(4)全面禁抗以后，对于养殖场你有什么好的建议？_(答一点即可)。解析(1)抗生素具有杀菌作用，可以防治畜禽疾病，提高个人经济效益，因此药物饲料添加剂一般添加抗生素。(2)滥用抗生素的后果是导致细菌的耐药性增强，且长期使用让畜禽机体免疫力下降。(3)分别配制含一定浓度抗生素的培养基A和不含抗生素的培养基
18、B(相互对照)，用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，倒平板备用。分离纯化菌种时，为了对活菌进行计数，可采用稀释涂布平板法接种于新的培养基平板上，使聚集在一起的细菌细胞分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便纯化菌种。因此，用无菌水对猪肠腔液进行梯度稀释，每个稀释梯度用稀释涂布平板法各接种A、B培养基上各三个平板；为了排除培养基被污染，需设置接种无菌水的培养基作为空白对照；因为肠道微生物适宜生活在无氧的环境中，应为厌氧型微生物，所以应该在其他条件适宜的无氧环境中培养12天。计数：选择菌落数在30300的平板进行计数，计算出A、B培养基肠腔液中微生物的比值。(4)全面禁抗以后，养殖场的牲畜发病情况会有所上升，养殖场可以：提高现场饲养管理水平，以减少疾病的发生；改善畜舍环境条件，提升动物福利，减轻应激程度。答案(1)抗生素具有杀菌作用，可以防治畜禽疾病，提高个人经济效益(2)耐药性下降(3)不含抗生素的高压蒸汽灭菌无菌水稀释涂布平板接种无菌水的培养基无氧30300A、B培养基肠腔液中微生物的比值(肠腔液中耐抗生素微生物的比例)(4) 提高现场饲养管理水平，以减少疾病的发生；改善畜舍环境条件，提升动物福利，减轻应激程度(答一点即可)