1、 第九周周末作业 班级： 姓名： 家长签字： 【知识梳理】DNA的粗提取与鉴定一、实验原理提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。1DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。（0.14mol/L时溶解度最低）此外，DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质
2、进一步的分离。2DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受6080oC的高温，而DNA在80oC以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。3DNA的鉴定 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。二、实验设计实验材料的选取 凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。破碎细胞，获取含DNA的滤液 动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤
3、剂溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。注意：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？利用细胞吸水涨破的原理。加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。DNA的析出与鉴定 将处理后的溶液过滤，加入与滤液体
4、积相等、冷却的酒精溶液，静置23min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。四、注意事项1以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠防止血液凝固。2加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操
5、作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。4DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的关系：当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度降低；当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L时，随浓度升高，DNA的溶解度升高。【典型习题】1下列关于DNA聚合酶催化合成DNA子链的说法中，正确的是（ ） A以DNA为模板，使DNA子链从5，端延伸到3，端的一种酶 BTaqDNA聚合酶必须在每次高温变性处理后再添加 CTaqDNA聚合酶能特异性地复制整个DNA的全部序列 DTaqDNA聚
6、合酶是从深海生态系统中发现的2在PCR反应中，只有一个DNA片段作为模板，经过一次循环后，含引物的单链占DNA总数的 （ ） A1/2 B1/4 C1 D1/83蛋白酶能将蛋白质水解而使DNA分离出来，下列药品同样可达到这个目（ ） A蒸馏水 BNaCl溶液 CNaOH溶液 D盐酸4将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第2层是 （ ）A甲苯 B血红蛋白水溶液 C脂溶性物质的沉淀层 D其他杂质的沉淀5在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是（ ）A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B洗涤时离心速度过低，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果C洗涤过程选用0.1的生理盐水D透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质6在做“提取DNA实验”时，某学生试图用人血代替鸡血，没有成功，原因是( ） A操作方法不对 B人血含DNA太少 CNaCl溶液浓度太高 D加二苯胺太少