1、选修一教材基础知识梳理： 专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养一、基础知识1、培养基（1）营养组成：一般都含有 碳源 、 氮源 、 水 和 无机盐 。 （2）种类：按物理状态分有 固体 培养基（加了琼脂）和 液体 培养基。 按功能分有 选择 培养基和 鉴别 培养基2、无菌技术：（1）获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵 。（2）消毒和灭菌的比较比较项作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子常用方法消毒较温和表面和内部一部分不能杀灭煮沸消毒、巴氏消毒、酒精消毒等灭菌强烈所有微生物可以杀灭灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌思考1无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是 防止感
2、染实验操作者 。思考2日常生活经常用到的是 煮沸 消毒法； 对一些不耐高温的液体，则使用 巴氏 消毒法； 实验操作者的双手使用 酒精 进行消毒； 饮水水源用 氯气 进行消毒。思考3(1)接种环、接种针、试管口等使用 灼烧 灭菌法，所用器具是 酒精灯 ；(2)玻璃器皿、金属用具等使用 干热 灭菌法，所用器械是 干热灭菌箱 ；(3)培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法，所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 ；二、大肠杆菌的纯化培养：可分成 制备培养基 和 纯化大肠杆菌 两个阶段。1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（1）操作步骤： 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 。思考1在称量操作中，动作要迅速，主要是为了防止
3、 防止牛肉膏吸收空气中水分 。思考2溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是防止 琼脂糊底而导致烧杯破裂 。（2）倒平板操作：待培养基冷却至 50 左右时在酒精灯火焰附近操作进行。2、纯化大肠杆菌（1）原理：设法在培养基中得到由一个 细菌 繁殖而来的肉眼可见的 菌落 ，即获得较纯的菌种。（2）接种微生物的方法：最常用的是 平板划线法 和 稀释涂布平板法 。三、菌种保藏的方法1、临时保藏法：放在 4 的冰箱中保藏。主要用于 频繁使用 的菌种。2、甘油管藏法：放在 -20 的冷冻箱中保存。主要用于 长期使用 的菌种。四、教材思考题及答案1、用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触感觉不烫手时，
4、就可以进行倒平板了。2、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。6、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。7、在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：这样能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、基础知识：1、背景知识：尿素CO(NH2)2需被 尿素细菌 产生的 脲酶 分解为NH
5、3，才能被植物吸收利用。2、筛选菌株的原理：人为提供有利于 目的菌株 生长的条件，同时 抑制 或 阻止 其他微生物生长。3、统计菌落数目：常用方法有 显微镜直接计数 和 活菌计数法 。 活菌计数法：即利用稀释涂布平板法统计样品中 活菌 数目，为了保证结果准确，选择菌落数在 30300 的平板进行计数，且每个稀释度涂布 3 个平板 ，再取平均值。4、如何排除培养基是否被污染了：可培养没有接种微生物的空白培养基看是否有菌落生成。二、实验操作1、制备培养基：制备以尿素 为唯一氮源的 选择 培养基。2、微生物的培养与观察：（1）接种：稀释涂布平板法 。（2）培养：恒温箱中培养。（3）观察：每隔24小时
6、统计一次菌落数。3、细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在 30300 的平板进行计数。4、鉴定：（1）鉴定分解尿素的细菌的培养基：在以尿素为唯一氮源的培养基中加 酚红 指示剂，。（2）鉴定原理：细菌中的 尿酶 催化尿素分解成 氨 培养基的 碱性 增强指示剂变 红 。课题3 分解纤维素微生物的分离一、基础知识： 1、纤维素与纤维素酶（1）纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生 纤维素酶 。（2）纤维素酶是一种 复合酶 ，它至少包括三种组分：C1酶、CX酶 和 葡萄糖苷酶 。2、纤维素分解菌的筛选（1）方法： 刚果红 染色法。（2）原理：刚果红（CR）可以与纤维素形成 红色
7、复合物 ，但并不与被 纤维素酶 分解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当培养基中的纤维素被分解后，会出现以 纤维素分解菌 为中心的 透明圈 ，我们可以通过是否 产生透明圈 来筛选纤维素分解菌。二、实验设计将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的鉴别培养基上挑选产生透明圈的菌落纯化培养选择培养土壤取样梯度稀释思考1阅读资料二“选择培养基”，回答以下三个问题：1、纤维素分解菌选择培养基属于 液体 培养基，原因是 该培养基中没有加凝固剂琼脂 。2、培养基选择作用机制是 只有能利用纤维素的微生物才能在该培养基中生长 。3、若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是 将纤维素粉改为葡萄糖 。三、课题延伸：发酵产纤维素酶的方法有： 液体 发酵和 固体 发酵。四、教材思考题及：为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？答：在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。