1、水朝阳草薄层色谱鉴别方法的建立徐晓芳舒娟石玉梅【摘 要】目的：建立水朝阳草的薄层色谱鉴别方法。方法：取本品粉末 2g，加石油醚（3060）40 mL，超声处理 20 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸 1 mL 与乙酸乙酯 50 mL，超声处理 40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 2 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品，加甲醇制成每 1 mL 各含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液。将供试品溶液 10 l、对照品溶液 5 L 点于聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（115112）的上层溶液为展开剂，展开后，置紫外光灯（365 n
2、m）下检视。结果：薄层色谱图谱检出绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸，且斑点清晰，专属性强。结论：该方法可作为水朝阳草的薄层鉴别方法。【关键词】水朝阳草;绿原酸;3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸;薄层色谱【中图分类号】R284.1【文献标志码】A【文章编号】1007-8517（2020）4-0039-03Establishment of TLC Identification Method of Shui Chaoyang GrassXU Xiaofang SHU Juan SHI YumeiTongren Food and Drug Inspection Institute，Tongren 55
3、4300，ChinaAbstract：Objective To establish a thin-layer chromatographicidentification.method for water radiance.MethodsTake 2g of this productpowder，add 40 ml of petroleum ether（3060），sonicate for 20 minutes，discard petroleum ether，dry the dregs，add 1ml of dilute hydrochloric acidand 50 ml of ethyl a
4、cetate，sonicate for 40 minutes，filter After that，thefiltrate was evaporated to dryness，and the residue was dissolved in 2 ml ofmethanol to be dissolved.Another chlorogenic acid，3，5-O-dicaffeoylquinicacid reference substance was added，and methanol was added to make a solutioncontaining 1 mg per 1 ml，
5、which was used as a reference solution.Point 10 ULof test solution and 5 u L of reference solution on polyamide film，and theupper layer solution of toluene-ethyl acetate-formic acid-glacial acetic acid-water（115112）was used as a developing solvent.After deployment，the UV lamp（365 nm）is viewed.Result
6、sThe obtained thin layerchromatogram showed chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoylquinic acid，and thespots were clear and the specificity was strong.ConclusionThis method canbe used as a thin layer identification method for water sungrass.Key words：Shui Chaoyang Grass;Chlorogenic Acid;3，5-o-dicaffeoy
7、lquinicacid;TLC水朝陽草为菊科旋覆花属植物水朝阳花 Inula helianthus-aquatica C.Y.Wu ex Ling.的新鲜或干燥地上部分。夏、秋二季采割，鲜用或干燥1。水朝阳草始载于滇南本草，滇南本草调其“生水内，花朝阳”，故名水朝阳草。菊科旋覆花属植物中绿原酸有较广泛的抑菌作用，3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等诸多药理作用。近年来发现许多有机酸具有多方面的生理活性，如绿原酸、异绿原酸具有很强的抗菌作用2。为有效控制水朝阳草药材质量，本文以绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸为对照，采用薄层色谱法鉴别，操作简便、结果直观。1 仪器与材
8、料1.1 仪器 KQ-500E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），梅特勒 XPE56 电子天平。1.2 材料 绿原酸（批号：110753-200413）、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸（批号：111782-201204）中国食品药品检定研究院。水为纯化水，其他试剂为分析纯。水朝阳草样品分别采集自贵州龙里、开阳、清镇（见表 1），且所有样品均经贵阳中医学院何顺志教授鉴定。2 方法与结果2.1 提取方法的考察 称取 S1 样品 2 g 3 份，分别按下述方法处理后作为供试品溶液：加甲醇 50 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 2 mL 使溶解，作为供试品溶液。加石油醚
9、（3060）20 mL，弃去石油醚，药渣挥干，加乙酸乙酯 50mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 2 mL 使溶解，作为供试品溶液。加石油醚（3060）40 mL，超声处理 20 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸 1mL 与乙酸乙酯 50 mL，超声处理 40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 2 mL 使溶解，作为供试品溶液。取上述供试品溶液 10 L、对照品溶液 5 L，点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（115112）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果：方法主斑点不清晰;方法主斑点不清晰;方法主
10、斑点清晰，薄层色谱图展距适中，故选择方法为供试品溶液的制备方法。2.2 展开剂的考察 取 S1 样品按提取方法制成供试品溶液，取供试品溶液 10 uL、对照品溶液各 5 L 点于聚酰胺薄膜上，分别在下述展开系统中展开：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（820.5）。冰醋酸。甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（115112）的上层溶液。展开后，取出晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果：系统分离效果差，对照品斑点未显出;系统对照品 3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸斑点清晰，但与绿原酸对照品对应斑点未分开，未达到理想的分离效果;系统两个主斑点清晰，分离效果好。因此选择为水朝阳草薄层色谱鉴别的展开剂。2.3 耐
11、用性考察2.3.1 温度的考察 进行低温（7）、室温（20）、高温（40）的考察。结果表明在上述条件下都能较好分离，斑点清晰，未有明显差异。2.3.2 湿度的考察进行低湿度（28%）、中等湿度（58%）和高湿度（88%）的考察。结果表明在上述条件下都能较好分离，斑点清晰，未有明显差异。2.3.3 不同生产厂家聚酰胺薄膜的考察 取 S1 样品按提取方法制成供试品溶液，取供试品溶液 10 L、对照品溶液 5 L 点于聚酰胺薄膜上，为国药集团化学试剂有限公司生产的聚酰胺薄膜为浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂生产的聚酰胺薄膜。结果：两个厂家聚酰胺薄膜都能较好分离，未有明显差异。2.4 水朝陽草的薄层色谱
12、鉴别 取本品粉末 2 g，加石油醚（3060）40 mL，超声处理 20 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸 1 mL 与乙酸乙酯 50 mL，超声处理 40min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 2 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品，加甲醇制成每 1 mL 各含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验（通则 0502），吸取供试品溶液 10 L、对照品溶液 5L，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（115112）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱
13、相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图 1 所示。3 讨论水朝阳草具有降气化痰、祛风除湿功效。主咳嗽痰多，胞闷气喘，风湿痹痛3，用于治疗咳嗽痰多，胸闷气喘，风湿性关节炎和外伤骨折疼痛等，是我国民间常用的中草药之一。体外癌细胞株筛选实验证明水朝阳草有抗癌作用，对多种实体癌具有不同程度的抑制作用，对人体肺癌、口腔表皮细胞癌等 6 种癌细胞具有杀灭作用4、5。2003 年版贵州省中药材、民族药材质量标准收载的水朝阳草只有性状描述，缺乏必要的质量控制项目。本实验从提取方法、展开系统考察等方面对水朝阳草进行了系统研究，最终选出上述薄层鉴别方法，在该实验过程中，同时进行了水朝阳花的薄层研究，该方法同样适合水
14、朝阳花的薄层鉴别，如图 1 所示。该方法分离效果好、专属性强、斑点清晰，为更好地控制水朝阳草质量提供了科学依据。参考文献1贵州省药品监督管理局编.贵州省中药材、民族药材质量标准M.贵阳：贵州科技出版社，2003：112.2林瑞超.中药药品检验检测技术指南M.北京：人民卫生出版社，2017：82.3中华本草编委会.中华本草（第七册）M.上海：上海科学技术出版社，1999：870.4胡美英，梁红，梁红，等.水朝阳草抗癌化学成分的筛选研究J.中国民族民间医药，1998（6）：43-45.5张人伟，林咏月，戚育芳，等.水朝阳草抗癌化学成分的研究J.天然产物研究与开发，1998（1）：31-33.（收稿日期：2019-12-05 编辑：刘 斌）作者简介：徐晓芳（1988-），女，汉族，本科，主管药师，研究方向为中药及中成药检测。E-mail：emailprotected
