1、课题3 血红蛋白的提取与分离一、选择题1凝胶色谱法是根据_分离蛋白质的有效方法。(B)A分子的大小B相对分子质量的大小C带电荷的多少D溶解度解析由凝胶色谱法分离蛋白质的原理可知，凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。2SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是(C)A增大蛋白质的相对分子质量B可改变蛋白质的形状C掩盖不同种蛋白质间的电荷差别D减少蛋白质的相对分子质量解析SDS的作用是使蛋白质完全变性，SDS所带负电荷量大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖不同种类蛋白质间电荷差别。3下列对在凝胶色谱柱上加入样品和洗脱的操作的叙述，不正确的是(C)A加样前要使柱内凝胶面上
2、的缓冲液下降到与凝胶面平齐B让吸管管口沿管壁环绕移动，贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面C打开下端出口，待样品完全进入凝胶层后直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱D待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集解析 待样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口，小心加入缓冲液到适当高度，之后再连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。4在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是(D)A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B洗涤时离心速度过低，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果C洗涤过程选用0.1%的生理盐水D透析的目的是去除样品中相对分子质量较
3、小的杂质解析洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，A错误；洗涤时要低速短时离心，以防止白细胞沉淀，B错误；洗涤红细胞选用0.9%的生理盐水，C错误；透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质，D正确。故选D。5蛋白质的分离与提纯技术是蛋白质研究的重要技术，下列有关叙述不正确的是(A)A根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性，可将样品中各种不同蛋白质分离B根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小，可通过电泳分离蛋白质C根据蛋白质相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质D根据蛋白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法分离蛋白质解析蛋白质分子不能透过半透膜，据此可利用半透膜除去样品中相对分子质量小的杂质
4、，而不是分离样品中的蛋白质；根据蛋白质的带电荷性质，可通过电泳分离蛋白质；根据蛋白质的相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质；根据蛋白质的分子大小、密度不同，可用离心沉降法分离蛋白质。二、非选择题6血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。(1)将实验流程补充完整：A为_血红蛋白的释放_，B为_样品的加入和洗脱_。凝胶色谱法是根据_相对分子质量的大小_来分离蛋白质的有效方法。(2)洗涤红细胞的目的是去除_杂蛋白(或血浆蛋白)_，洗涤次数过少，无法完全除去；离心速度过高和时间过长会使_白细胞_一同沉淀，达不到分
5、离的效果。洗涤干净的标志是_离心后的上清液不再呈现黄色_。释放血红蛋白的过程中起作用的是_蒸馏水和甲苯_。(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是_加速样品在凝胶柱中的流动_。如果红色区带_均匀一致地移动_，说明色谱柱制作成功。解析 (1)样品处理及粗分离过程为：红细胞的洗涤血红蛋白的释放分离血红蛋白溶液透析，凝胶色谱操作过程为：凝胶色谱柱的制作凝胶色谱柱的装填样品的加入和洗脱，所以A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱，凝胶色谱法的原理是分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流
6、动慢。(2)洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白，以利于后续步骤的分离纯化，洗涤次数少，无法除去血浆蛋白，此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度，重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净；由于甲苯是表面活性剂的一种，可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，蒸馏水能使红细胞涨破。(3)磷酸缓冲液(pH为7.0)能够模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致，洗脱时利用缓冲液，可以加快样品在凝胶柱中的流动；如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。