1、课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、选择题1下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(A)AKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H4O、葡萄糖、尿素、琼脂、水BKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H4O、葡萄糖、琼脂、水CKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H4O、尿素、琼脂、水DKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H4O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水解析根据题意可知，该培养基中必须要有尿素，故可排除B、D；而培养基中必须含有有机物作为碳源，又可排除C，故只有A符合题意。2从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的(C)A将土壤用无菌水稀释，制备103105土
2、壤稀释液B将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上C用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌D从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株解析将土壤用无菌水稀释，然后经过系列稀释，制备103105土壤稀释液；A正确；将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上；B正确；用加入酚红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌，刚果红指示剂是用于分离分解纤维素的菌；C错误；分解尿素的菌在分解尿素时产生氨气，氨气能使酚红指示剂显红色，从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株；D正确。3在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落
3、。A同学的结果产生原因可能有(A)由于土样不同由于培养基污染由于操作失误 没有设置对照ABCD解析A同学比其他同学的实验结果数据大许多，可能是由于选取的土样不同、培养基灭菌不彻底或操作过程中被杂菌污染，也可能操作失误，如配制培养基时混入其他含氮物质、稀释度不够准确等。4请选出下列正确的步骤(D)土壤取样称取10 g土壤放入盛有90 g无菌水的锥形瓶中吸取0.1 mL进行平板涂布依次稀释101、102、103、104、105、106、107稀释度ABCD解析分离分解尿素的细菌的过程是：土壤取样称取10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中依次稀释至101、102、103、104、105、10
4、6、107稀释度吸取0.1 mL进行平板涂布，C正确。5能够测定样品活菌数的方法是(A)A稀释涂布平板法B直接计数法C重量法D比浊法解析直接计数法是利用特定的细菌计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量，不能区分死菌与活菌。重量法是用于微生物测定的一种方法，有湿重和干重，测蛋白质和DNA含量反映细胞的物质量。比浊法是在一定范围内，菌的悬液中细胞浓度与浑浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。活菌在适宜培养基和良好生长条件下通过生长形成菌落，此法又称活菌计数法。二、非选择题6土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请据图回答相关问题：
5、(1)能分解尿素的细菌代谢类型为_异养型_，为获得该种细菌，应从富含有机质的土壤表层取土样。(2)为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用_以尿素为唯一氮源_的培养基进行分离，并加入_酚红_指示剂进行鉴别。(3)因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液。取样稀释前，一定要_摇匀_以减少误差。将103107倍的稀释液分别吸取0.1 mL加入到固体培养基上，用_涂布器_将菌液铺平，这种接种方法称为_稀释涂布平板法_。(4)将接种的培养皿放置在37 恒温培养箱中培养2448 h，观察并统计具有_红色环带_(现象)的菌落数，结果如下表，其中_105和106_倍的稀释比较合
6、适。稀释倍数103104105106107菌落数(个)5003672483618解析(1)能分解尿素的细菌可将尿素分解成氨，代谢类型为异养型。(2)分离土壤中分解尿素的细菌，应该用以尿素为唯一氮源的培养基进行分离，分解尿素的细菌在分解尿素时产生氨，使酚红指示剂显红色，所以要加入酚红指示剂进行鉴别。(3)取样稀释前，一定要将菌液摇匀以减少误差；将103107倍的稀释液分别吸取0.1 mL加入到固体培养基上，用稀释涂布平板法进行接种，需要将菌液用涂布器涂布到固体培养基上。(4)将接种的培养皿放置在37 恒温培养箱中培养2448 h，具有红色环带的菌落即是分解尿素的细菌的菌落。估算样品中的活菌数时，往往选取菌落数在30到300之间的平板，分析表格数据可知，105和106的稀释度下菌落数在这一范围。