1、生物实验专题复习序号实验名称1细胞的观察和测量2食物中主要营养成分的鉴定3探究植物细胞外界溶液浓度与质壁分离的关系4颤藻和水绵细胞的比较观察5探究酶的高效性6叶绿体色素的提取和分离7探究影响光合作用的因素8酵母菌的呼吸方式9观察牛蛙的脊髓反射现象10小麦胚芽鞘的向光弯曲11DNA分子模型的搭建12植物细胞有丝分裂的观察13植物细胞分化的观察14性状分离比的模拟试验15果蝇唾液腺细胞染色体观察16植物物种多样性的调查17培养基的配制18微生物的接种以及菌落和抗生素抑菌现象的观察十一、DNA分子模型的搭建考点提示：1、脱氧核苷酸由哪几部分构成的？（一个磷酸、一个脱氧核糖、一个含氮碱基）2、含氮碱基
2、有哪几种？脱氧核苷酸有哪几种？（A.T.C.G及含有该四种碱基的四种脱氧核苷酸）3、 每个脱氧核苷酸之间是在脱氧核糖和磷酸的部位连接。4、DNA分子的外侧是磷酸和脱氧核糖，它们交替连结构成了DNA分子的基本骨架，内侧是碱基对。5、得出A和T配对，G和C配对，这就是碱基互补配对原则。6、DNA双螺旋结构模型，DNA分子是向右螺旋的结构，螺旋一周就是一个螺距，每个螺距有10个碱基对，长度为3.4纳米。7、碱基对的排列顺序千变万化，可以看出DNA具有什么性？（多样性）强调：正是由于DNA分子的多样性，所以使我们的自然界丰富多彩。8、每个特定的DNA分子都具有其特定的碱基排列顺序，说明DNA还具有什么
3、性？（特异性）9、脱氧核糖和磷酸交替排列的骨架始终在外侧，碱基互补配对原则始终没变，这又体现了DNA分子的什么性呢？（稳定性）10小结：DNA分子的结构是由两条互为平行的多核苷酸链构成，方向相反, 外侧由脱氧核糖和磷酸交替连成基本骨架，内侧是碱基对。碱基之间A与T配对，G与C配对，反之亦然。这就是碱基互补配对原则。碱基之间靠氢键连接，A和T之间两个氢键，C和G之间三个氢键。经螺旋后形成了一个双螺旋的结构。练习：下列模型中，属于J.Watson和F.Crick提出的DNA双螺旋模型是（ ）A B C D十二、植物细胞有丝分裂的观察在完成了观察洋葱根尖分生区细胞有丝分裂实验后，教师给学生提供了2份
4、资料。资料一：一份“实验报告”的部分内容（一）解离：剪取洋葱根尖5cm，放入盛有质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精混合液（体积比为1:1）的玻璃皿中，在室温下解离35min。（二）染色：把根尖放在盛有0.01g/mL龙胆紫溶液的玻璃皿中染色35 min。（三）漂洗：将根尖放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10min。（四）制片：将根尖放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子把根尖弄碎，盖上载玻片，用拇指轻轻按压资料二：全班20个实验小组的实验数据汇总表（注：各小组计数50个细胞，实验条件与观察计数方法相同）细胞周期间 期分 裂 期前期中期后期和末期实验小组1计数细胞个数43412实验小组2计数
5、细胞个数44303全班计数细胞个数880671885计数细胞总数1 000各时期细胞数的百分比88.06.71.83.5（1）请改正“资料一”中的3处错误。_（2）若已知洋葱根尖分生区细胞的细胞周期为12.0h，请根据“资料二”，在答题卡上的饼状图中表示出间期、前期、中期以及后期和末期所占的时间（单位：h，精确到小数点后一位）。（3）有些因素会影响细胞周期各时期的长短，实验过程中也会产生一些误差。因而对整个实验结果可能产生影响的有_。取材时间 根尖培养温度 解离时间长短 载玻片厚度 计数的细胞是否属于分生区细胞 细胞周期各时期区分是否准确参考答案：（1）将“5cm”改成“23mm”；实验操作步
6、骤应改为先漂洗后染色；将“盖上载玻片”改成“盖上盖玻片后，再盖上2层吸水纸” （2）见下图 （3）十三、植物细胞分化的观察考点提示：1、 为什么观察植物细胞有丝分裂选材是根尖前端23毫米，而观察植物细胞分化实验则选择整个根尖?2、 根尖伸长区细胞的分化特点是什么？3、 成熟区分化出那些不同功能的细胞？参考答案：1、 根尖前端23mm处是分生区，有部分细胞在分裂。分生区上部的伸长区和成熟区有不断分化成熟的细胞。2、 细胞有长度上的生长，没有宽度上的生长。3、 输送水分的导管，输送有机物的筛管和具有根毛的表皮细胞十四、性状分离比的模拟实验考点提示：（1） 小桶中的小球代表什么？（2） 同一个小桶中
7、的两种小球的数目是否一定要相同？为什么？（3） 若将甲桶中小球数目增加一倍，是否会影响实验结果？为什么？参考答案：（1） 小球代表生物产生的配子。（2） 一定要相同，因为小球所代表的含不同基因的配子的数量应该是相同的。（3） 不会影响实验结果。因为每次抓取某种小球的几率不会改变。练习：甲、乙两位同学分别用小球做遗传定律模拟实验。甲每次分别从I、小桶中随机抓取一个小球并记录字母组合；乙每次分别从、小桶中随机抓取一个小球并记录字母组合。将抓取的小球分别放回原来小桶后并多次重复。分析下列叙述错误的是：A 甲、乙重复100次实验后，统计的Dd、AB组合的概率均约为50B 实验中每只小桶内两种小球必须相
8、等，但I、桶小球总数可不等C 乙同学的实验可模拟非同源染色体上非等位基因自由组合的过程D 甲同学的实验模拟的是遗传因子的分离和配子随机结合的过程十五、果蝇唾液腺细胞染色体观察考点提示：1、果蝇唾腺巨型染色体是大约10004000多条同源染色线精确配对聚集而成的多线染色体，这是染色体多次复制，但细胞只生长、不分裂的结果。染色体长达0.5mm，粗细是一般体细胞染色体的100200倍左右，其上有深浅间隔、宽窄不等的染色带，果蝇4对唾腺染色体上已确定了6000多条染色带，它们宽窄、疏密、顺序、数目恒定，有种的特异性，同种个体的是相同的，不同的种则不一样，因此果蝇多线染色体可以建立染色带及间带分布图，它
9、们的表现和遗传学图大致平行，多数遗传学家认为这些横纹与基因有对应关系，所以果蝇唾腺染色体是研究染色体结构畸变，基因定位及基因表达(mRNA合成)的良好材料。2、解离：在唾腺上加0.4%NaCl溶液，使细胞充分吸水膨胀，压片时染色体易分散。两分钟后吸去NaCl溶液， 滴加2滴1mol/LHCl，处理2分钟，这样粘附在唾腺上的脂肪体容易剔除，也有利于细胞分离和染色体伸展，便于压片。之后反复用清水把HCl洗净，以免影响染色。3、染色：醋酸洋红染液染色15分钟4、压片：加上盖片，覆上吸水纸，再以拇指垂直向下压片 十六、物种多样性的调查1、动物物种多样性的调查例：某种鼠的种群密度调查在调查动物的种群密度
10、时,一般多采用标志重捕法(捉放法)。就是在一个有比较明确界限的区域内,捕捉一定数量的动物个体进行标志,然后放回,经过一个适当时期(标志个体与未标志个体重新充分混合分布)后,再进行重捕。根据重捕样本中标志者的比例,估计该区域的种群总数,可计算出某种动物的种群密度。标志重捕法的前提是,标志个体与未标志个体在重捕时被捕的概率相等。在标志重捕法中,标志技术极为重要,在操作中应注意以下几点：1.标志物和标志方法必须对动物的身体不会产生对于寿命和行为的伤害。2.标志不能过分醒目。3.标志符号必须能够维持一定的时间,在调查研究期间不能消失。标志重捕法的应用比较广泛,适用于哺乳类、鸟类、爬行类、两栖类、鱼类和
11、昆虫等动物。方法：标志重捕法过程：捕捉一部分个体，标记、计数（P）后放回原环境一段时间后进行重捕，计数总捕获数（N1）和重捕中标记个体数（P1）。求种群数量（N）： N：P= N1：P1说明：应尽量防止种群内有迁入或迁出的个体。 2、植物物种都样性的调查方法：样方法实验过程一、 材料用具皮尺（或卷尺），尼龙绳，木橛子，钢笔（或圆珠笔），计录本等。二、 方法步骤及结果记录1.确定调查对象：本探究所调查的种群是植物或活动性弱的动物。2.选取样方：选取样方注意随机，样方面积可大可小（0.25平方米到10平方米）三、观察现象1、计数 2、 计算辛普森多样性指数四、实验结论辛普森多样性指数大，物种多样性
12、程度高。练习：“标志(记)重捕法”是动物种群密度调查中的一种常用取样调查法：在被调查种群的生存环境中，捕获一部分个体(M)全部进行标记后释放，经过一段时间后进行重捕，根据重捕中标记个体数(m)占总捕获数(n)的比例，估计该种群的数量(N)。某研究机构对我国北方草原一种主要害鼠布氏田鼠进行了调查。调查样方总面积为2hm(1hm=10000m2)，随机布设100个鼠笼，放置l夜后，统计所捕获的鼠数量、性别等，进行标记后放归；3日后进行重捕与调查。所得到的调查数据如下表。(1)假定重捕取样中标记比例与样方总数中标记比例相等，写出样方中种群总数(N)的计算公式 。(2)该草地布氏田鼠的平均种群密度为
13、只hm。事实上田鼠在被捕捉过一次后更难捕捉，上述计算所得的平均种群密度与实际种群密度相比可能会偏 。(3)综合两次捕获情况，该田鼠种群的性别比例()为 。(4)在上述调查的同时，还对样方中布氏田鼠的洞口数进行了调查(假设样方中只有这一种鼠)，平均每100m2有3.6个洞口，洞口数与田鼠数的比例关系为 。答案：(1)N=Mnm (2)144 高 (3)89 (或3236) (4)2.5 ：1十七、水质污染对生物的影响实验目的：认识水质污染对生物体存活的影响。实验原理：污水中的需氧细菌数量与有机物含量成正比，需氧细菌能氧化分解亚甲基蓝染料，使它从蓝色变成无色。若水样中需氧细菌越多，亚甲基蓝染液被分
14、解褪色得越快。合成洗涤剂是一类普遍使用的生活用品，属低毒有机物。它不易被分解，排入水体或摄入生物体内可逐步蓄积，当蓄积量超过一定程度时，就会污染水质并影响人体健康。实验材料：水蚤、放置1天的洗碗水、河水、自来水仪器试剂：显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、试管、试管架、量杯、吸水纸、秒表、0.01%亚甲基蓝染液、清水滴瓶、2%洗衣粉溶液实验步骤： 1水质有机物污染与需氧细菌数量的关系： 取放置一天的洗碗水、河水、自来水各5mL，分别注入标有1、2、3编号的试管中，在每支试管中各加5滴0.01%亚甲基蓝染液。把试管放在温暖处。30分钟后观察各试管内水样变色情况，并记录结果。 2合成洗涤剂污染对生物的影
15、响： 取4支试管，分别编号4、5、6、7，按下列顺序加入相应物质和水蚤。然后每隔10分钟观察1次，连续3次，比较各试管内水蚤活动情况，并记录每支试管内水蚤死亡数目。3无机离子对生物的影响： (1)取载玻片滴清水吸水蚤镜检(低) 记录(每分心搏数，重复3次，求平均值)正常值 (2)滴加1%KCl溶液1-2滴对侧引流重复1次镜检(低) 记录(水蚤活动状况和心搏变化情况)实验结果：1.水质有机物与污染与需氧细菌数量的关系：试管编号水样0.01%亚甲基蓝染液(滴)放置时间(分钟)实验现象实验结果及分析1洗碗水5302河水5303自来水5302合成洗涤剂污染对生物的影响：试管编号加2%洗衣粉溶液数量水蚤
16、存活及活动情况水蚤(只)清水(ml)10分钟后20分钟后30分钟后4510055105滴651025滴7555ml练习：1做实验用的水样需放置一天的原因是让水中的细菌充分繁殖。2污水中的有机物含量越高，则污水中的好氧细菌数量越多，后者能氧化分解亚甲基蓝染料，使它从蓝色变为无色。3用放置太久的洗碗水做水质污染实验时，不能使0.01亚甲蓝溶液褪色，其合理解释是( )A 溶解氧太低，好氧细菌已死亡 B 亚甲蓝溶液浓度太低C 好氧细菌大量繁殖 D 溶解氧太多十八、培养基的配制与灭菌 仪器和试剂 烧杯(500 ml、50ml)、三角烧瓶(250 ml)、量筒、玻璃棒、玻璃漏斗、酒精灯、培养皿、牛皮纸、纱
17、绳、托盘天平、灭菌锅、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、10NaOH、10盐酸、精密pH试纸、超净工作台实验方法 1根据培养基配方称取各种原料成分，加入到500 ml烧杯的少量自来水中溶解(其中牛肉膏可用50 ml烧杯称量，并用少许水加热溶解后再加入到本烧杯中)，定容至200 ml，用酒精灯加热至沸腾后加入琼脂2 g(长条状琼脂需用剪刀剪成小段)，继续加热至琼脂完全熔化(加热过程中要用玻璃棒不断搅拌，以防琼脂沉淀在杯底被烧焦)，然后用热水补足蒸发损失的水，使最后容积为200 ml，用精密pH试纸测试培养基pH，并用滴管吸取12滴10盐酸或10氢氧化钠调节pH至7.27.4。 2将完全熔化的上述培
18、养基趁热倒入250 ml的三角烧瓶中(注意不要把培养基沾在瓶口上，可通过一个漏斗注入三角烧瓶中)，用两层牛皮纸扎紧瓶口后，置于灭菌锅中于1.05 kgcm2、l21下灭菌1530 min。与此同时，还需将洗净干燥的培养皿若干套用牛皮纸包扎后一起灭菌。 3待灭菌后的培养基冷却至50左右时(或临用前加热熔化冷至50左右时)，在启动的超净工作台上打开三角烧瓶的包装纸，并用酒精灯火焰烧瓶口后，将培养基分别倒入灭过菌的培养皿中备用(如培养皿出现冷凝水，需将培养皿倒置在3037温箱内干燥)。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为通用培养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其
19、中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40时凝固，通常不被微生物分解利用。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。培养基配制的一般过程： 1称量 按培养基配方依次准确称取各成分于烧杯中。 2溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，放石棉网上加热，用玻棒搅匀，待药品完全溶解后再补充水分到所需量。若配制固体培养基，将称好的琼脂加入已溶化的药品中，再加热融化。 3
20、. 调pH 先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值。若偏酸，可用滴管逐滴加入10NaOH，边加边搅拌，随时用pH试纸检测，直至pH达到所需范围。若偏碱，则用10HCl进行调节。pH值不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子浓度。4. 分装 按实验要求将配制好的培养基趁热分装于试管或三角瓶内，不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。5加棉塞 培养基分装完毕，在试管口或三角瓶口塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等)，以防止外界微生物进人培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 6包扎 加塞后在三角瓶或试管(试管须先扎成捆)双层报纸，用一道绳扎好，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。用记号笔注明
21、培养基名称、组别、配制日期等。 7. 灭菌 将包扎好的培养基按各自所需的灭菌时间和温度进行高压蒸汽灭菌或其他方法灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放人冰箱内作短期保存。 8 无菌检查 将灭菌培养基放人37温箱中培养2428 h，以检查灭菌是否彻底。灭菌是杀灭物体上所有微生物的过程。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部微生物。 高温蒸汽灭菌法属于热力灭菌中的湿热法，是一种最有效的灭菌方法。它是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅（如右图）内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生高温蒸汽。该方法中灭菌的温度取决于蒸气的压力。在一个大气压下，蒸气的温度是100。如果蒸气被限制在密闭的容
22、器中，随着压力升高，蒸气的温度也相应升高。在1.05kg/cm2蒸气压下，温度达到121.3，维持1530min，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。同一温度下湿热的灭菌效力、比干热大得多，可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。火焰灭菌 直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。超净工作台简介： 超净工作台是一种局部净化设备，即利用空气洁净技术使一定操作区内的空间达到相对的无尘、无菌状态。一般用于细胞及微生物培养的接种过程。练习：1、细菌培养基常在121压力锅中灭菌
23、，如果只是在100的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活A大肠杆菌B一种青霉C枯草芽孢杆菌D沙门氏菌2、不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是A氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D水是该微生物的营养要素之一3、某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了4个实验，实验条件除图示外共他均相同。下列各图表示实验结果，据图可得出的初步结论是A污染主要不是培养基灭菌时间短造成的B污染主要来源于组织培养所用的离体组织C调节培养基pH不能解决污
24、染问题D调节培养温度不能解决污染问题4、氯苯化合物是重要的有机化工原料，因不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培养基配方如表1.（1）配制号固体培养基时，除添加号液体培养基成分外，还应添加1%的_。（2）培养基配制时，灭菌与调PH的先后顺序是_。（3）从用途上来说，号培养基和号培养基分别属于_培养基和_培养基。在号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是_。（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为_。（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在_
25、培养条件下最早停止生长，其原因是_。解析：本题主要考查微生物相关知识。固体培养基必须含有适量的琼脂； 配置培养基时应先调PH后灭菌；号培养基是为了获得更多的菌株，属于通用培养基，号培养基是为选择出SP1菌株属于选择培养基，号培养基成分中含N物质为硝酸铵，则应由它为SP1菌株提供氮源；在恶劣环境下一些菌体会形成芽孢休眠体，来度过不良环境；SP1菌株是以氯苯为碳源，当氯苯消耗尽菌株因缺少碳源而不能继续生存，故氯苯含量越少，SP1菌株越早停止生长。答案：（1）琼脂（2）先调PH，后灭菌（3）通用 选择 硝酸铵（4）芽孢（5）20mg/L氯苯 氯苯最早耗尽十九、微生物的接种以及菌落和抗生素抑菌现象的观
26、察材料选择 大肠杆菌、枯草杆菌、滕黄八叠球菌等细菌菌种及其悬液仪器和试剂 接种环、无菌滴管、无菌玻璃刮铲、镊子、记号笔、直尺、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固体培养基、分别浸过不同浓度抗生素和无菌水的圆纸片实验方法一、接种和菌落观察1将菌种和接种用具置于启动的超净工作台上510 min。2点燃酒精灯，打开菌种试管封口后将管口在火焰上烧一下，并将试管口置于火焰附近，然后灼烧接种环，将接种环于菌种试管培养基无菌落处冷却后刮取少许菌苔，将菌苔用划线法涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基表面。注意转动培养皿，在三个方向上划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落(图123)。3倒置培养皿，于37下培养23 d后观察和比
27、较各种细菌菌落的形态。二、抗生素对微生物的抑制作用1用三支无菌滴管分别吸取上述三种细菌的悬浮液12滴，滴于三个平板培养基表面，然后分别用三个无菌玻璃刮铲涂匀。2用无菌镊子将分别浸过不同浓度的某种抗生素和无菌水的圆纸片(沥干的)均匀置于上述三个平板培养基表面(事先已在培养皿底部用记号笔做好记号)。3在37恒温箱中培养23 d后，在培养皿底部用直尺测量每个圆纸片周围清晰区的宽度，并记录。有超净工作台的学校，上述实验在超净工作台上进行效果更好。常用的接种方法有以下几种：1. 划线法 这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。2.
28、 点接法，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。菌落介绍：菌落（colony）单个微生物在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度形成肉眼可见有一定形态结构的子细胞的群落。将分散的细胞或孢子接种到培养基上，在适宜条件，使其生长繁殖。由于细胞受到固体培养基表面或深层的限制，子代菌体常以母细胞为中心聚集在一起，形成具有一定形态结构的子细胞群体。各种微生物在一定条件下形成的菌落特征（如大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等）具有一定的稳定性，是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种的重要依据。菌落特征与微生物的菌体形
29、态结构特征密切相关。例如细菌、酵母菌不形成菌丝，其菌落仅生长在固体培养基表面，可用接种工具将其全部挑起，即与培养基结合不紧密；而放线菌、霉菌的菌体大多分化为营养菌丝与繁殖菌丝，其营养菌丝深入培养基中吸取营养，故具有与培养基结合较紧，不易挑起等特征。 抑菌圈测量介绍： 抑菌圈测量是微生物分析的经典方法。它是利用抑菌物质在涂布特定试验菌的琼脂培养基内成球形立体状扩散，抑制试验菌的繁殖，在抑菌物质的周围形成透明圈，即抑菌圈。抑菌圈越大说明该细菌对此抑菌物质敏感性越大，反之越小。抑菌圈测量目前得到了广泛应用，如：抗生素的效价测定；新药的筛选；抑菌活性菌株的筛选；材料抗菌作用的研究；植物抑菌活性的筛选研
30、究；抑菌保鲜作用的研究等等。小课题：用选择培养基分离土壤中的自生固氮菌1从土壤分离自生固氮菌的实验步骤。(1)土壤取样：通常从菜园土表35 cm以下的土层中取土壤样品。(2)土壤样品稀释：通常取土壤10g，放入无菌研钵中，注入无菌水5 ml，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。上述过程在超净台上操作。(3)培养基配制：分离自生固氮茵的培养基，通常采用无氮培养基。在这种培养基上，其他类型的微生物不能生长，而自生固氮菌能利用空气中的N2作为氮源进行生长。 阿什比无氮培养基成分：葡萄糖10 g、磷酸二氢钾0.2 g、硫酸镁0.2 g、氯化钠0.2 g、硫酸钙5 g，蒸馏水1000 ml，pH7.0。 培养
31、基加入1琼脂(需用自来水流水冲洗几天，再用蒸馏水浸泡，洗涤几次，以除去琼脂中的氮)制成固体培养基，经高压灭菌后备用(方法见实验1.2)。(4)接种方法：在超净台上，将接种环在火焰上灭菌后冷却，蘸取少许上述稀释液，轻轻地点在无氮培养基表面，共点接1520处；也可采用划线法接种(方法见实验13)。(5)培养：接种后，将培养皿倒置，放在2830恒温箱中培养3-4 d。注意：培养时间不宜过长，否则菌落会分泌含氮化合物，引起杂菌生长。(6)观察：观察菌落的形状、大小和颜色。(7)镜检(选做)：取一片酒精消毒处理过的载玻片，烘烤后冷却，在中央滴一滴无菌水；用灭过菌的接种环从单个茵落中挑取少许菌涂在水滴中央
32、，加一滴结晶紫液(0.1 g结晶紫溶解在100ml水中制得)染色1min；另取一片载玻片倾斜3045，从液滴左侧向右侧移动，然后自右向左推移，推出一层均匀的菌膜，制成临时涂片；让涂片自然干燥后，在高倍镜下观察，被染料染成紫色的细菌是自生固氮茵。自生固氮菌通常呈杆状或短杆状，周围有荚膜，常常两个细胞连在一起。(8)纯化(选做)：在超净工作台上用灭过菌的接种环挑取单个茵落，接种在阿什比无氮试管培养基上，经培养后冷藏在冰箱中保存。2小课题影响因素的设计(1)土壤取样：从不同深度土层取样，如地表以下4 cm、8 cm；从不同的土壤取样，如壤土、砂质土。(2)土壤样品稀释度：土壤样品10 g，注入无菌水
33、5 ml、10 ml。(3)接种方法：如点接法、划线法。二、生物实验涉及基本技术归纳1、玻片标本的制作（1）压片法，例如洋葱根尖细胞的有丝分裂（2）装片法，例如高倍镜下观察质壁分离和复原2、研磨、过滤，例如酶、色素等3、纸层析技术，例如叶绿素的分离等4、恒温技术，例如酶参与的生化反应等5、解离技术，例如细胞壁的破环、有丝分裂装片的制作等6、比色技术，例如还原糖、脂肪和蛋白质含量的鉴定等7、最常见的经典的实验方法汇总如下（在各种实验中常常用到）：A化学物质的检测方法(1)淀粉碘液(2)还原性糖班氏试剂(3)CO2Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂(4)乳酸pH试纸(5)O2余烬木条复燃(6)无O2火
34、焰熄灭(7)蛋白质双缩脲试剂(8)染色体龙胆紫、醋酸洋红溶液(9)脂肪苏丹B实验结果的显示方法（详见课件）(1)光合速率O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量(2)呼吸速率O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量(3)原子途径放射性同位素示踪法(4)细胞液浓度大小质壁分离(5)细胞是否死亡质壁分离、亚甲基蓝溶液染色(6)甲状腺激素作用动物耗氧量，发育速度等(7)生长激素作用生长速度（体重变化，身高变化）(8)胰岛素作用动物活动状态(9)菌量菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度(10)大肠杆菌伊红-美蓝琼脂培养基C实验条件的控制方法（详见课件）（1）增加水中氧气泵入空气或吹气或放入绿色植物（2）减少水中氧气容
35、器密封或油膜覆盖或用凉开水（3）除去容器中CO2NaOH溶液或KOH溶液（4）除去叶片中原有淀粉至于黑暗环境一昼夜（5）除去叶片中叶绿素酒精加热（6）除去光合作用对呼吸作用的干扰给植株遮光（7）如何得到单色光棱镜色散或彩色薄膜滤光（8）血液抗凝加入柠檬酸钠（9）线粒体提取细胞匀浆离心 (10)灭菌方法微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料，灭菌方法不同：培养基用高压蒸汽灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75%酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。 D实验中控制温度的方法(1)还原糖鉴定：加热煮沸(2)酶促反应：水浴保温(3)用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热(4)细胞
36、和组织培养以及微生物培养：恒温培养三、生物学中常用的试剂和药品1.染料及染色剂（1）染料：按染色对象分为胞核染料（龙胆紫、醋酸洋红），脂肪染料（苏丹）等。（2）染色剂：染料溶解在溶剂中而成的溶液。如醋酸洋红液、龙胆紫溶液、亚甲基蓝溶液（活体染色）、红墨水等。2.掌握几种制剂的作用（1）2，4-D生长素类似物：有双重性，低浓度促进生长；高浓度抑制生长；培育无籽果实。（2）秋水仙素：a.诱发基因突变。b.使染色体加倍，培育多倍体。c. 单倍体育种，培育纯种。（3）0.9%生理盐水（维持红细胞、口腔上皮细胞形态），10%KNO3溶液（植物细胞质壁分离和自动复原），20%盐酸溶液（对根尖解离），丙酮、
37、酒精（溶解色素），层析液（分离色素），龙胆紫溶液、醋酸洋红液（根尖细胞染色体染色），30%蔗糖溶液（植物细胞质壁分离和复原）（4）紫外线：一定剂量可作为能量、保温，高剂量可导致细胞基因突变。3、动手实验和教材中用到的或提到的试剂试 剂 用 途结 果碘液鉴定淀粉蓝色班氏试剂鉴定可溶性还原糖红黄色双缩脲试剂鉴定蛋白质紫色反应苏丹鉴定脂肪染成橘黄色班氏试剂测定尿糖红黄色伊红和美蓝鉴别大肠杆菌菌落呈紫黑色醋酸洋红溶液染色体着色染成红色龙胆紫溶液染色体着色染成紫色秋水仙素人工诱导多倍体染色体加倍硫酸二乙酸人工诱变发生基因突变亚硝酸人工诱变发生基因突变萘乙酸生长素类似物2，4D生长素类似物聚乙二醇诱导动物
38、细胞融合NaCl溶液溶解DNAHCl溶液和卡诺固定液解离、固定植物细胞FeCl3溶液催化剂（提供 Fe+）NaOH和HCl溶液调节pHH2CO3/NaHCO3血液中的缓冲物质NaH2PO4/Na2HPO4血液中的缓冲物质CaCO3防止叶绿体中色素破坏SiO2充分研磨叶片丙酮溶解叶绿体中色素层析液分离叶绿体中色素蔗糖溶液植物细胞质壁分离实验柠檬酸钠血液抗凝剂琼脂制作固态培养基酒精（95%）溶解细胞中的某些物质胰蛋白酶使动物细胞分散可溶性淀粉溶液和淀粉酶溶液加碘液温度对酶活性影响的实验牛肉膏、蛋白胨和NaCl、琼脂制备培养细菌的培养基高考生物实验设计专题复习实验设计题图解一、实验设计的题型1、设计
39、实验方案型：给出实验用具、材料、药品、实验目的，或只给实验目的，实验器材自选，设计实验方案。2、改错型：分析已有实验设计方案中不科学性，并提出改进。3、补充完善型：对已有的实验设计进行补充和完善。4、分析原因型：对已有的实验设计方案的某些步骤、结果等进行分析。1、设计实验型例：蚕豆染色体2N=12，其根尖在19条件下，一个细胞周期所占的时间为19.3小时。为了证实烟草浸出液能引起真核细胞染色体结构畸变，老师需要在课前制作植物根尖细胞临时装片进行观察。现有100粒正待萌发的蚕豆种子、实验药品及各种实验器材，请你帮助老师完成上述实验的课前准备。1）实验原理：_2）为了得到更多的蚕豆根尖材料，可以采
40、取什么方法？_3）主要的实验步骤，第一步_，第二步_4）本实验的材料在烟草浸出液中培养，至少要有培养_小时，才可观察到染色体畸变现象。2、改错型例：为证明“唾液淀粉酶对淀粉有消化作用”，某同学制订了下列实验方案：(1)实验目的(略) (2) 实验材料和用具(略)(3) 实验方法和步骤： 取2支试管，编号为A和B，各注人2ml浆糊 用凉开水漱口后，用小烧杯收集唾液 向A试管内加人2ml唾液 向2支试管中各滴加2滴碘液 将2支试管振荡后放在37水中恒温10min，同时取出2支试管，观察试管内溶液颜色的变化(4) 结论：唾液中含有淀粉酶能将淀粉分解成麦芽糖问：该实验的方法和步骤以及结论有没有错误？如
41、果有请指出并改正。3、补充完善型例：光和叶绿体是光合作用的重要条件，淀粉是光合作用的主要产物。要验证光合作用需要光和叶绿体，请根据提供的实验材料和用具，补充完整实验步骤和实验结果，并分析回答有关问题：一.材料用具：银边天竺葵，黑纸板，白纸板，吸管，适宜浓度的酒精，碘液，回形针，打孔器。二.方法步骤：第一步：_第二步：将黑纸板用回形针夹在绿色部位上，然后把植株放在阳光下照射4-6h第三步：剪下此叶片，用打孔器分别在A_，B_，C_部位各取几个小圆片第四步：把取下的叶圆片放入装有酒精溶液的试管中，热水浴加热，脱色，清水中漂洗第五步：将三种小圆片放在白纸板上，用吸管吸取碘液，分别滴在其上三.预期结果
42、：A_，B_ ，C_为验证pH值对唾液淀粉酶活性的影响，实验如下：(1)操作步骤： 在15号试管中分别加入05的淀粉液2ml； 加完淀粉液后，向各试管中加入相应的缓冲液3.00ml，使各试管中反应液的pH值依次稳定在5.00,6.20,6.80,7.40,8.00； 分别向15号试管中加入0.5唾液1ml，然后进行37恒温水浴； 反应过程中，每隔1min从第3号试管中取出1滴反应液，滴在比色板上，加1滴碘液显色，待呈橙黄色时，立即取出5支试管，加碘液显色并比色，记录结果。(2)结果见表12-1：请回答：(1)实验过程为什么要选择37恒温？(2)3号试管加碘液后出现橙黄色，说明什么？(3)如果反
43、应速度过快，应当对唾液做怎样的调整？(4)该实验得出的结论是什么？二、实验设计的基本方法1、明确实验目的和要求2、搞清实验原理3、确定实验思路4、设计实验步骤5、观察实验现象、记录数据6、预测实验结果及分析7、实验结论8、做出实验评价三、实验设计原则1、对照的原则(有对照组和实验组)1）意义： 有了“对照”可排除干扰因素，提高可信度2）教你一招： “编号” 实验处理会用“适量”一词 对照组会用“等量”一词设置对照原则 有比较才有鉴别，对照是实验控制的手段之一，通过设置对照实验，可以消除无关因子对结果的影响，证明实验的客观性，具有说服力和可信度。因而，一个实验通常分：实验组和对照组，分完组之后要
44、注意编号。对照实验的类型1.空白对照： 指不做处理的对照组。2.相互对照： 指不另设对照组，而是几个实验组相互对比对照。如：在“植物胚芽鞘向光性”实验中就运用到此对照原则。利用若干组燕麦胚芽的不同条件处理的实验组之间的对照，说明了生长素与植物生长弯曲的关系。 3.自身对照： 指实验与对照在同一对象上进行，不另设对照组。如：“植物质壁分离和复原实验”就是典型的自身对照，关键是观察实验前后的动态变化。 4.条件对照： 给实验组某种处理，给对照组另一种条件的处理。 例 如 “动物激素饲喂小动物”的实习实验，采用等组实验法，其实验设计方案是： 甲组：饲喂甲状腺激素（实验组）； 乙组：饲喂甲状腺抑制剂（
45、条件对照组）； 丙组：不饲喂药剂（空白对照组）； 该实验即设置了条件对照，又设置了空白对照，通过比较、对照、更能充分说明实验变量甲状腺激素有促进动物的生长发育。例题讲解 胰高血糖素对小白鼠和人具有相同的生理作用。为验证“胰高血糖素具有升高血糖的生理作用”，请以小白鼠为实验对象设计实验步骤，预测和解释实验应出现的结果，写出实验结论。（一）实验材料和用具：正常实验小白鼠2只，生理盐水，用生理盐水配制的适宜浓度的胰高血糖素溶液，班氏试剂，注射器，试管，烧杯等。（二）实验步骤：（实验提示：采用腹腔注射给药，给药剂量不作实验设计要求；给药1小时后，用注射器在小鼠膀胱处穿刺取尿液。）（1）确定1只鼠为实验
46、鼠，腹腔注射胰高血糖素溶液；另一只鼠为对照鼠，腹腔注射等量生理盐水。（2）将两支试管分别编号为1号和2号，各加入等量的班氏试剂。（3）给药1小时后，对两只小白鼠采尿液，实验鼠尿液放入1号试管内，对照鼠尿液放入2号试管内。（4）将两支试管摇匀后，放入盛有开水的烧杯内加热煮沸，观察两支试管溶液颜色的变化。（三）实验结果的预测、解释和结论： 1号试管中应该出现红黄色沉淀，实验鼠尿液中有葡萄糖；2号试管中仍为蓝色溶液，表明对照鼠尿液中无葡萄糖。实验结论：实验鼠血糖升高，超过一定数值而出现糖尿，是胰高血糖素具有升高血糖的生理作用所引起的。2、单一变量的原则1）实验变量、反应变量和无关变量2）只能进行单因
47、子对比研究3）其余因子均需进行不变量控制，主要体现在实验过程同条件控制4）同条件指：实验组与对照组所用器材、所处环境、起始和终止时间等均相同5）教你一招： 会用“适宜条件”一词， 会用“过了一段时间”进行观察(或测量)3、随机化原则实验研究的样本必须是从总体上任意抽取的，即要求总体中的每个部分都有同样被抽中的可能性。1)调查取样时不能有选择，应注意分布均匀与有代表性2)多个实验材料分组时，应任意分配，不加人为干扰3)教你一招：会用“随机”一词4、重复性原则 任何实验都必须经得起重复，这是具有科学性的重要标志。做任何实验都会产生误差，“重复”是实验中减少误差，避免偶然性的重要手段。1）一般以实验
48、材料数量上“多个”来实施重复2）有条件也可在实验过程上实施重复3）注意点：小型易取材料(例种子)数量上常各取20个左右四、实验条件的控制方法-1 增加水中O2：泵入空气或吹气或放入绿色植物 减少水中O2：容器密封或油膜覆盖或用凉开水 除去容器中CO2：NaOH溶液、Na2CO3溶液 除去叶中原有淀粉：置于黑暗环境（饥饿） 除去叶中叶绿素：酒精水浴加热（酒精脱色） 除去植物光合作用对呼吸作用的干扰：给植株遮光 单色光的获得：棱镜色散 血液抗凝：加入柠檬酸钠（去掉血液中的Ca2+） 线粒体提取：细胞匀浆离心 骨无机盐的除去：HCl溶液 消除叶片中脱落酸的影响：去除成熟的叶片 消除植株本身的生长素：
49、去掉生长旺盛的器官或组织（芽、生长点） 补充植物激素的方法：涂抹、喷洒、用含植物激素的琼脂作载体 补充动物激素的方法：口服（饲喂）、注射 阻断植物激素传递：插云母片法 隔绝气体密封玻璃容器可用石蜡，隔绝液体和空气可用油膜，排气或充气根据升温或冷却 固体材料的研磨可用二氧化硅，叶绿体或其它细胞器要注意保护（叶绿体用碳酸钙）。细胞破裂加清水，细胞失水加氯化钠盐溶液，注意搅拌 PH值，缓冲溶液（HCO-/H2CO3、HPO4-/H2PO42-） 矿质元素、激素施加或除去，注意量的控制五、实验结果的显示方法-实验现象的观测指标-1 光合作用：O2释放量或CO2吸收量或有机物生成量例：水生植物可依气泡的
50、产生量或产生速率；离体叶片若事先沉入水底可依单位时间内上浮的叶片数目；植物体上的叶片可依指示剂（如碘液）处理后叶片颜色深浅。 呼吸作用：O2吸收量或CO2释放量或有机物消耗量 原子或分子转移途径：同位素标记法或元素示踪法 细胞液浓度大小或植物细胞活性：质壁分离与复原 溶液浓度的大小：U型管+半透膜 甲状腺激素作用：动物耗氧量、发育速度等 生长激素作用：生长速度(体重、体长变化) 胰岛素作用：动物活动状态(是否出现低血糖症状-昏迷) 胰高血糖素作用：尿糖的检测(在尿液中加班氏试剂进行沸水浴，看是否出现红黄色沉淀) 菌量的多少：菌落数、亚甲基蓝褪色程度 生长素作用及浓度高低的显示：可通过去除胚芽鞘
51、后补充生长素后的胚芽生长情况来判断（弯曲、高度） 淀粉：碘液（变蓝色） 还原性糖：班氏试剂（沸水浴后生成红黄色沉淀） CO2：Ca(OH)2溶液（澄清石灰水变浑浊) 乳酸：pH试纸 O2：余烬复燃 蛋白质：双缩脲试剂（紫红色） 脂肪：苏丹染液（橘黄色） 菌量：菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度 大肠杆菌：伊红-美蓝琼脂培养基例题讲解 据药理研究，一种茅草的根内含有降血糖的因子及多种有益于健康的成分，某公司将它开发成一种保健饮料。该产品是否适用于糖尿病患者，生物学兴趣小组的同学以此作为实验研究课题。请你完成下面的实验鉴定报告：1)实验目的：鉴定一种茅草的根是否含有还原性糖和淀粉。2)实验原理：还原性糖可用_试剂、淀粉可用_试剂来检测3)实验器材：一种茅草的根、所需试剂、刀片、载玻片、酒精灯、试管夹、火柴、滴管。4) 设计实验步骤： 鉴定还原性糖：_ 鉴定淀粉：_5)实验现象：_6)结果分析：_7)在鉴定还原性糖的实验操作：_
