1、微生物的实验室培养一、选择题(每小题4分，共24分)1有关倒平板的操作错误的是(C)A将灭菌的培养皿放置在火焰旁的桌面上B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上D等待培养基冷却凝固后需要将平板倒过来放置解析：倒平板时，应用左手拇指和食指将培养皿的盖打开一条稍大于锥形瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，并立即盖上盖。不能将培养皿盖放在桌面上，以免造成杂菌污染。2为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是(D)A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的固体斜面培养基上C临时保藏的菌种容易被污染或产生变异D对
2、于需要长期保存的菌种，可以采用4 低温保藏的方法解析：对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在3 mL甘油瓶中加入1 mL甘油后灭菌，将1 mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20 的冷冻箱中保存。3稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是(C)A操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面C不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个菌落D操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理解析：若菌液浓度过大，形成的菌落连在一起，得不到单个的菌落。4在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)
3、如下图，且甲乙的对应位置不变。有关叙述，错误的是(D)A配制培养基时需进行高压蒸汽灭菌B连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落C图示接种过程中接种环至少灼烧了5次D甲中a区域为划线的起始位置解析：为了能彻底灭菌，配制的培养基需进行高压蒸汽灭菌，A正确；连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落，B正确；由于每次使用接种环前后都要灼烧灭菌，从图示甲中4次划线接种就可推出，接种过程中接种环至少灼烧了5次，C正确；起始划线的区域长出的菌落多且密，根据甲乙对应区域对比，甲中a区域为划线的结束位置，D错误。5.下列检测某熟制食品中大肠杆菌是否超标的实验操作，不合理的是(A)A待检测食品需要经过灭菌操作后取样
4、检测B应设置未接种的培养基，作为实验的对照C用稀释涂布平板法接种计数大肠杆菌的活菌数D接种后将培养皿倒置并在适宜温度下培养解析：待检测食品灭菌后会将大肠杆菌杀死，则不能检测大肠杆菌是否超标，A错误；应设置未接种的培养基，作为实验的对照，B正确；用稀释涂布平板法接种计数大肠杆菌的活菌数，C正确；接种后应该将培养皿倒置，并在适宜温度下培养，D正确。6用平板划线法或稀释涂布平板法都可以纯化大肠杆菌，二者的共同点有几项(B)可以用相同的培养基 都要使用接种环进行接种都需要在火焰旁边进行接种 都可以用来计数活菌A一项 B二项 C三项 D四项解析：平板划线法或稀释涂布平板法都是在固体培养基上进行的，描述正
5、确；平板划线法接种用接种针，稀释涂布平板法接种要用涂布器，描述错误；不论是平板划线法还是稀释涂布平板法都需要进行无菌操作，在酒精灯火焰旁进行，描述正确；平板划线法不能用于计数活菌，只能用于分离菌种；稀释涂布平板法可以用来计数活菌，描述错误；综上所述，正确的是。二、非选择题(共26分)7(12分)在调查某湖水中H细菌指数(1升水中含有的H细菌个数)的实验中，先将5升湖水水样浓缩至5毫升，然后各取浓缩水样1毫升，涂布到4个培养皿中培养，培养后统计的菌落数分别是42、38、55、18。请回答：(1)培养基中的蛋白胨和淀粉为细菌生长提供了氮源、碳源。(2)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖
6、水水样的平板置于恒温培养箱中培养，培养的温度设定在37 。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种等量无菌水作为对照。(3)细菌培养产生的单个菌落在生态学中称为种群。用这种方法测定密度，实际活菌数目要比测得的数目多，原因是当两个或多个细胞连在一起时在平板上观察到的是一个菌落。(4)为了纯化获得的H细菌，在微生物的实验室培养过程中，关键是无菌操作(防止杂菌污染)，而实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉。解析：(1)蛋白胨含有氮，通常作为氮源，淀粉通常作为碳源。(2)恒温培养箱能够保证细菌生长最适温度，故细菌数量增长较快。在另一平板上接种等量无菌水作为对照，判断细菌数量。
7、(3)细菌培养产生的单个肉眼可见的子细胞群体称为菌落，生态系统中称为种群，去掉18这个偏差较大组，其他3组(42、38、55)取平均值为45。用稀释涂布平板法进行微生物计数时，由于两个或多个细胞连在一起时在平板上观察到的是一个菌落，所以实际活菌数目要比测得的数目多。(4)为了纯化获得的H细菌，在微生物的实验室培养过程中，关键是无菌操作；实验结束，为避免微生物污染环境和操作者，使用过的培养基应该进行灭菌后才能倒掉。8(14分)在生物技术上常利用大肠杆菌制成“工程菌”。某生物小组的同学，利用实验室提供的大肠杆菌品系及其他必要材料，对该品质大肠杆菌进行了培养。请分析回答下列问题。(1)微生物在生长过
8、程中对各种成分的需求量不同，故制备培养基时各成分要有合适的浓度和比例。培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分别为微生物提供氮源(碳源)、碳源。(2)配制培养基时，各种成分在溶化后分装前必须调节pH，接种前要进行灭菌处理。(3)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是高压蒸汽灭菌。(4)在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒过来放置，这样做的目的是防止皿盖上的水珠落入培养基而造成污染。(5)甲同学采用平板划线法接种，获得单个菌落后继续筛选，在每次划线之前都要灼烧接种环，他这样做的目的是杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种。在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？需要，为什么？防止接
9、种环上残留的菌种对环境造成污染和感染操作者。(6)实验结束时，使用过的培养基应进行灭菌处理后才能倒掉，这样做的目的是防止环境污染。解析：(1)培养基中各成分要有合适的浓度和比例，保证微生物有充足的营养，又不会因外界浓度过大而失水。淀粉提供碳源，而蛋白胨含C、N等元素，既能提供碳源，又能提供氮源。(2)各种成分溶化后分装前要调节pH，接种前对培养基灭菌，防止杂菌污染。(3)培养基灭菌用高压蒸汽法。(4)倒平板时，平板冷凝后应倒置，否则皿盖上的水珠会落入培养基造成污染。(5)每次划线前都要灼烧接种环，将上次划线残留的菌种杀死，使细菌尽快分散成单个。最后一次灼烧接种环是为了防止残留的菌种污染环境。(6)使用过的培养基要彻底灭菌后倒掉，否则培养基中的微生物会污染环境。
