1、预习导航情境导入课程目标1.了解植物组织培养的基本原理。2会制备MS固体培养基。3掌握植物组织培养的基本技术。4能进行菊花的组织培养。一、植物组织培养的基本过程1细胞分化：在植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。自主思考 细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？提示：使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。2愈伤组织：由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过细胞分裂过程形成的组织，叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化、呈无定形状态的薄壁细胞。3脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织
2、的过程，又叫去分化。4再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官。5植物组织培养的过程可简单表示为二、影响植物组织培养的因素1内部因素不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。同种植物材料的年龄、保存时间的长短等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。2外部因素(1)营养条件：常用的是MS培养基，其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S；微量元素，如Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co；有机物，如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。(2)植物激素：植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关
3、键性因素。植物激素的浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果，如下表。使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素有利于分裂但不分化先细胞分裂素，后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高生长素/细胞分裂素比值与结果比值高时促进根的分化，抑制芽的形成比值低时促进芽分化，抑制根形成比值适中促进愈伤组织生长(3)环境因素：pH、温度、光等环境条件也能影响植物组织培养。三、实验操作过程1制备MS固体培养基(1)配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成的浓缩液。使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，并加蒸馏水稀释。(2)配制培养基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，并
4、用蒸馏水定容到1 000 毫升。在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，原因是菊花茎段组织培养比较容易。(3)灭菌：采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。2外植体消毒轻松判断(1)在此消毒过程中，强度越大越好。（ ）(2)植物组织培养中无菌技术是操作成功的关键，针对培养基和外植体应进行灭菌操作。（ ）提示：(1)对外植体进行表面消毒时，既要考虑到药剂的消毒效果，又要考虑到植物的耐受力。(2)对培养基应进行高压蒸汽灭菌，对外植体应先后使用体积分数为70%的酒精及质量分数为0.1%的氯化汞予以消毒。3接种：用体积分数为70%的酒精消毒工作台，点燃酒精灯。注意所有接种工作都必须在酒精灯火焰旁进行，器械使用前后都要用火焰灼烧灭菌。接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种68个外植体。4培养：放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜的温度和光照。5移栽：移栽前应先打开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。
