1、抑制 miRNA-141 能够促进人牙周膜中成纤维细胞的增殖李小莉【摘要】目的 探讨 miRNA-141 对人牙周膜中成纤维细胞（hPDLF）的作用。方法 抑制 miRNA-141 后，使用 qRT-PCR 和 Western blot 检测 hPDLF 的增殖能力。结果 miRNA-141 在牙周炎 hPDLF 中显著低表达;使用 miRNA-141 inhibitor抑制 miRNA-141 表达后，能够显著增加 hPDLF 中 CyclinD1、C-myc 蛋白表达，差异有统计学意义（P0.05）。结论 抑制 miRNA-141 表达能够增加 hPDLF 的增殖。【关键词】miRNA-1
2、41;hPDLF;增殖【中图分类号】R781.4【文献标识码】A【文章编号】ISSN.2095.6681.2019.34.01牙周病主要是以牙周组织的损坏为特征的常见病，而人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）是牙周组织的主要细胞。增加 hPDLF 的增殖能够促进牙周组织的再生，从而增加压根与牙槽骨的连接，研究发现微小 RNA（microRNA，miRNA）与 hPDLF 的增殖有着密切的关系，马静雯等1发现 miRNA-145 可能通过下调ROCK1 的表达抑制 hPDLF 的迁移。miRNA 是一种单链核苷酸，能够与特定基因mRNA 的 3-UTR 结合，从而调控细胞的生理功能。Mak CS 2
3、发现 miR-141/KLF12 可增强无神经耐药性。但是 miRNA-141 在 hPDLF 中的作用还不清楚。本文主要通过 Western blot 等技术研究 miRNA-141 对 hPDLF 增殖的影响。1 方法1.1 hPDLF 的培养选择临床 930 岁健康人和牙周炎患者恒牙。取牙膜组织并分离成小块，于37、5%CO2 培养箱中培养。1.2 实时定量 PCR（qRT-PCR）检测细胞中 miRNA-141 的表达使用 TRIzol 法提取总 RNA，并使用试剂盒进行 qRT-PCR 检测。1.3 Western blot 检测 CyclinD1 和 c-myc 蛋白表达收集细胞，
4、裂解、变性，并电泳、转膜，与不同抗体孵育过夜后，孵育二抗 1h 后，置于成像系统中拍照。1.4 统计学方法使用 SPSS 16.0 统计软件进行分析，实验数据均以 xs 表示，两组之间比较采用 t 检验，以 P2 结 果本课题首先使用 qRT-PCR 检测 miRNA-141 的表达，如图 A 所示，牙周炎患者的hPDLF 中 miRNA-141 显著高于健康组，且差异有显著意义，差异有统计学意义（P0.05）。如图 B 所示，miRNA-141 inhibitor 能够显著下调 miRNA-141 的表达。如图 C 所示，hPDLF 中癌基因 Cyclin D1、C-myc 表达显著升高，差
5、异有统计学意义（P0.05）。3 讨 论hPDLF 是牙周膜组织中的主要效应细胞，能够通过自身的增殖降低牙周组织的坏死，还可以分化成成骨细胞。因此，如何增加 hPDLF 的增殖是治疗和改善牙周病的关键。本研究发现，miRNA-141 在牙周炎 hPDLF 中高表达。使用 miRNA-141 inhibitor 抑制 miRNA-141 表达后能够显著增加细胞增殖相关蛋白CyclinD1 和 C-myc 的表达。周茜雯等4研究发现，箭根酮能够明显抑制 LPS刺激的 hPDLF 增殖。综上所述，本研究发现抑制 miRNA-141 表达可以增加hPDLF 的增殖，从而改善牙周病组织微环境。这说明 m
6、iR-141 可以作为治疗的靶点之一。参考文献1 马静雯，宋 萌，潘劲松，等.miRNA-145 通过下调 ROCK1 的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移J.现代生物医学进展，2018，18（04）：606-609.2 Mak CS，Yung MM，Hui LM，et al.MicroRNA-141 enhances anoikisresistance in metastatic progression of ovarian cancer throughtargeting KLF12/Sp1/survivin axis J.Mol Cancer，2017，16（1）：11-13.3 周茜雯，曾 豪，张嘉昕，等.箭根酮对 LPS 刺激牙周膜成纤维细胞增殖能力的影響J.口腔医学研究，2018，34（06）：653-656.本文编辑：赵小龙