1、第一节酶的制备及活力测定一、酶的存在及提取1酶是在生物体活细胞中合成的。其参与反应部位可以在细胞内，也可以在细胞外。2在酶的提取过程中，温度、酸碱性等多种环境条件都可能影响酶的空间结构，导致酶变性，甚至丧失活力。因而提取出的酶首先需要检测酶的活力。3酶的活力通常以单位时间内底物的消耗量或者在单位时间内产物的生成量来表示。在测定单位时间内麦芽糖的生成量来检测淀粉酶的活力的实验中，测麦芽糖的产量可用分光光度法。二、酶活力的测定方法和原理1提取酶液：研磨水稻种子时需加石英砂，目的是充分研磨。制取匀浆并离心后，取上清液，其中一份要在水浴中加热，目的是使酶失活。2滴加酶液。3恒温处理。4钝化处理：酶促反
2、应进行一段时间后要向反应液中加物质的量浓度为0.4 mol/L的NaOH溶液，目的是钝化酶的活性，使反应终止。5测定吸光值：测定吸光值时要把反应液与2_mL_3，5二硝基水杨酸试剂混匀，并沸水浴5 min，才能产生麦芽糖产物。然后分别移入四支比色杯，用分光光度计在波长520 nm处进行比色。6绘制标准曲线。一、植物淀粉酶活力的测定原理：淀粉酶将淀粉水解成麦芽糖。在NaOH和丙三醇存在下，3，5-二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在520 nm波长处有最大吸收峰，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测
3、定样品中的含糖量。方法步骤：提取酶液分成两份，一份加热使酶失活向四支试管各加缓冲液4 mL，1、2号试管加未煮过的新鲜酶液1 mL，3、4号试管加煮过的酶液1 mL恒温(40 )5 min钝化处理(0.4 mol/L NaOH)测定吸收光值绘制标准曲线计算淀粉酶的活力。淀粉酶活力mg/(gmin)(AA)样品稀释总体积/样品鲜重Vt式中：A为淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量(在标准曲线上查得)，A为淀粉酶的对照管中的麦芽糖量(mg)，V为比色时所用样品液体积(mL)；t为酶促反应时间(min)。二、用高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶的活力原理：过氧化氢酶可以催化H2O2分解为水和氧，其反应如下：2H2
4、O22H2OO2如果在反应系统中加入适当过量的过氧化氢溶液，经酶促反应后，在酸性条件下，用标准高锰酸钾溶液滴定多余的H2O2，反应如下：5H2O22KMnO44H2SO45O22KHSO48H2O2MnSO4根据消耗的H2O2的量计算出过氧化氢酶的活力。酶活力用每克鲜重样品1 min内分解H2O2的毫克数表示。过氧化氢酶活力mg/(gmin)(AB)(VT/VS)1.7/Wt式中：A为对照KMnO4滴定毫升数(mL)；B为酶反应后KMnO4滴定毫升数(mL)；VT为提取酶液总量(mL)，VS为反应时所用酶液量(mL)，W为样品鲜重(g)；t为反应时间(min)；1.7为换算系数，即每消耗1 m
5、L物质的量浓度为0.1 mol/L的高锰酸钾溶液，相当于样品中含有1.7 mg H2O2。用分光光度法也可测定过氧化氢酶的活力。在有过氧化氢存在时，H2O2将愈创木酚氧化生成茶褐色物质，后者在波长为470 nm处有最大吸收峰，再用721型分光光度计进行测定。探究影响酶活力的因素为了研究温度对某种酶活性的影响，设置三个实验组：A组(20 )、B组(40 )和C组(60 )，测定各组在不同反应时间内的产物浓度(其他条件相同)，结果如图。回答下列问题：(1)三个温度条件下，该酶活性最高的是_组。(2)在t1之前，如果A组温度提高10 ，那么A组酶催化反应的速度会_。(3)如果在t2时，向C组反应体系
6、中增加2倍量的底物，其他条件保持不变，那么在t3时，C组产物总量_，原因是_。(4)生物体内酶的化学本质是_，其特性有_(答出两点即可)。审题导析精讲精析(1)在60 条件下，反应的最终产物浓度比20 和40 条件下小很多，说明酶在60 条件下最终失活。20 与40 条件下相比，40 时酶促反应到达反应平衡的时间短，说明40 条件下酶活性较高。(2)在t1前，如果A组温度提高10 变成30 ，由该酶活性随温度的变化规律可知，30 条件下该酶的活性大于20 条件下的，那么A组酶催化反应的速度会加快。(3)t2时C组的产物浓度已不再增加，但由A和B组t2时的产物浓度可知，t2时C组底物并未全部被分
7、解，C组产物浓度不再增加是由于在C组温度条件下t2时酶已经变性失活。因此如果在t2时，向C组增加2倍量的底物，在其他条件不变的情况下，t3时产物的总量也不会再增加。(4)生物体内酶的化学本质绝大多数是蛋白质，极少数是RNA。酶具有高效性、专一性等特性，并且需要适宜的温度和pH等。答案(1)B(2)加快(3)不变60 条件下，t2时酶已失活，即使增加底物，反应产物总量也不会增加(4)蛋白质或RNA高效性和专一性(其他合理答案可酌情给分)将实验数据转换成曲线图的方法(1)以自变量为横坐标，以因变量为纵坐标建立直角坐标系；(2)注明坐标轴的名称、单位、坐标原点以及曲线名称；(3)每个坐标轴上的取值单
8、位要相等；(4)将实验数据标到坐标系中，并用相应线型连接起来。种子萌发时，贮藏物质发生水解作用过程中，活力最高的酶应该是()脂肪酶淀粉酶蛋白酶转氨酶过氧化氢酶蔗糖酶A B C DA植物种子中贮存的物质是不能被细胞直接利用的大分子物质，如蛋白质、脂肪、淀粉等。它们必须转化成溶于水的小分子物质才能被植物细胞所利用，在转化过程中，起作用的是各种水解酶。如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等。酶的制备和应用下列有关淀粉酶制备的描述错误的是()A选材应选萌发的水稻种子(或其他含淀粉多的种子)B研磨时加入石英砂使研磨更加充分C用蒸馏水稀释的目的是让细胞吸水涨破D室温下放置及振荡的目的是让酶充分溶解审题导析解析植物细胞
9、有细胞壁不能用吸水涨破法。答案C制备酶时应注意选材，具体有：(1)所要制备的酶是什么酶(2)它所存在的组织或细胞(3)含量较多的时期食品种类多，酸碱度范围广。生物兴趣小组拟探究在食品生产中应用范围较广的蛋白酶，查阅相关文献，得知：(1)pH对不同蛋白酶的活力影响有差异。据图可知，_更适宜作为食品添加剂，理由是_。蛋白酶的活力可用_的量来表示。(2)该蛋白酶的提取工艺流程如下：兴趣小组分别对酶保护剂浓度、提取液pH进行了探究实验。结果显示，酶保护剂浓度在0.020.06 mol/L范围内，酶活力较高；提取液pH在6.08.0范围内，酶活力较高。他们认为，要进一步提高粗酶制剂的酶活力，以达到最佳提
10、取效果，还需对酶保护剂浓度和提取液pH进行优化，并确定以此为探究课题。请拟定该课题名称，设计实验结果记录表。解析(1)题目中已经提供了信息“食品种类多，酸碱度范围广”，所以选择的食品添加剂应该有较广的酸碱度适应范围。由图可知，木瓜蛋白酶的活力不随pH的变化而变化，所以可以选作食品添加剂。酶的活力可用单位时间内、单位体积中底物的减少量(或产物的增加量)来表示。(2)由题中信息已知酶保护剂的适宜浓度范围和提取液pH的适宜范围，故实验的自变量是酶保护剂的浓度和提取液的pH，需在适宜范围内确定较小的梯度进行实验。实验结果记录表要包含自变量酶保护剂的浓度和提取液的pH以及因变量底物的减少量(或产物的产生
11、量)。答案(1)木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶的活力不随pH的变化而变化单位时间内、单位体积中底物减少(或产物增加)(2)课题：探究酶保护剂的浓度和提取液的pH的最佳组合1下列与酶的活性有关的说法不正确的是()A酶的活性是由蛋白质结构决定的，不受外界条件的影响B酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力C酶的活性受温度、酸碱性等因素的影响D酶活性高低与反应物浓度无关A酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力，其高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的反应速度来表示。酶的催化作用受外界条件影响，温度、酸碱性等对酶的催化能力都有较大影响，反应物浓度与酶的活性高低无关。2下列关于酶的论述错误的是()A酶的数量随
12、化学反应的进行而减少B有的酶是蛋白质，有的是核酸C酶的活性与pH有关D细胞内、外都可能有酶存在A酶的特性之一就是反应前后保持不变。3如图表示在不同条件下，酶促反应的速度变化曲线，试分析：(1)酶促反应的速度可以用_来表示。(2)和相比较，酶促反应速度慢，这是因为_。(3)图中AB段和BC段影响酶促反应速度的主要限制因子分别是_和_。(4)若想探究酶的最适pH，至少应设计_种不同的pH。(5)请在原图中绘出在酶浓度相对值为1个单位、温度为25 条件下酶促反应速度曲线。解析酶促反应速度可用底物利用速率或产物生成速率表示。图中与的不同在于反应温度，AB段说明影响反应速度的是底物浓度，而BC段则是酶浓度。在探究pH(或温度)对酶活性的影响时，常设置高、适、低三个条件。答案(1)底物利用速率(或产物生成速率)(2)温度低，酶活性降低(3)底物浓度酶浓度(4)3(5)如图(虚线所示)